非(fei)洲(zhou)豬(zhu)瘟（ASF）是生豬養殖(zhi)業的(de)頭號(hao)威(wei)脅，其(qi)強傳(chuan)染(ran)性(xing)與(yu)高死亡率可(ke)造成巨(ju)大經濟(ji)損(sun)失。快速、準(zhun)確(que)的早(zao)期檢(jian)測(ce)是防(fang)控(kong)疫情的關鍵(jian)。
非(fei)洲(zhou)豬(zhu)瘟快檢(jian)儀作(zuo)為核心(xin)工(gong)具，已廣泛應(ying)用於養殖(zhi)場(chang)、屠(tu)宰場(chang)及檢(jian)驗檢(jian)疫環(huan)節。掌(zhang)握其規範(fan)操(cao)作(zuo)方(fang)法，不(bu)僅能提(ti)升(sheng)檢(jian)測(ce)效率，更能為疫情預(yu)警(jing)和(he)精(jing)準(zhun)處(chu)置(zhi)提供(gong)可(ke)靠(kao)依(yi)據(ju)。
壹(yi)、檢(jian)測(ce)前的(de)周(zhou)密(mi)準(zhun)備(bei)
1.樣(yang)本(ben)采(cai)集與(yu)處理
樣本(ben)質量(liang)直接(jie)決(jue)定檢(jian)測(ce)結果的(de)可(ke)靠(kao)性(xing)。常(chang)見(jian)樣本(ben)類(lei)型(xing)包(bao)括(kuo)：
①血液(ye)樣本(ben)：采(cai)集豬(zhu)只靜(jing)脈血(xue)後，靜(jing)置析(xi)出(chu)血(xue)清(qing)或(huo)使用抗凝血(xue)漿(jiang)。需離(li)心(xin)去(qu)除(chu)雜(za)質，收(shou)集上清(qing)液。
②組(zu)織樣(yang)本(ben)：取(qu)少(shao)量(liang)組織勻漿(jiang)後，用PBS緩(huan)沖(chong)液稀釋(shi)，離心(xin)取(qu)上清(qing)。
③口(kou)鼻/環(huan)境(jing)拭子(zi)：將(jiang)棉(mian)簽深(shen)入豬(zhu)只鼻腔(qiang)或(huo)口(kou)腔旋轉取(qu)樣，浸(jin)入緩(huan)沖液混(hun)合(he)後使用。
所有樣本(ben)需避(bi)免(mian)反復(fu)凍(dong)融，若(ruo)含防(fang)腐劑NaN3需註(zhu)意(yi)其可(ke)能影(ying)響(xiang)酶(mei)反應(ying)。
2.儀器與試(shi)劑準(zhun)備(bei)
①儀器校準(zhun)：開(kai)機(ji)前確(que)保(bao)設備放(fang)置於水平臺(tai)面(mian)，通(tong)風口(kou)無遮(zhe)擋，環(huan)境(jing)溫度保(bao)持在15–35℃。部(bu)分(fen)儀器需預(yu)熱以(yi)避免(mian)溫(wen)差幹擾。
②試(shi)劑配(pei)制：根據(ju)檢(jian)測(ce)需求(qiu)選(xuan)擇配(pei)套(tao)試(shi)劑盒(he)。試(shi)劑需平衡(heng)至室(shi)溫(wen)，濃(nong)縮洗滌(di)液按(an)比例(li)稀釋(shi)。
實驗需備(bei)齊(qi)微(wei)量(liang)加(jia)樣器、離心(xin)管(guan)、封(feng)板(ban)膜等耗材(cai)，避(bi)免(mian)交叉汙(wu)染(ran)。
二(er)、規範(fan)操(cao)作(zuo)流程(cheng)與(yu)關鍵(jian)步(bu)驟
不同(tong)原(yuan)理(li)的快檢(jian)儀操(cao)作(zuo)側(ce)重(zhong)不同，但均(jun)需嚴(yan)格遵(zun)循流程(cheng)：
1.熒(ying)光(guang)PCR快檢(jian)儀
①加(jia)樣與(yu)程序設置：將(jiang)處(chu)理(li)好(hao)的(de)樣本(ben)與(yu)反(fan)應(ying)液加入PCR管(guan)，放(fang)置於儀器樣品艙(cang)。在觸(chu)摸(mo)屏(ping)上選(xuan)擇預(yu)設程序，設置溫度與時間(jian)參數(shu)。
②運(yun)行與(yu)監控(kong)：啟動(dong)後，儀器自(zi)動(dong)進行核酸(suan)擴增(zeng)及熒光(guang)信(xin)號采(cai)集。操(cao)作(zuo)員需實(shi)時觀察擴增(zeng)曲(qu)線，確(que)保(bao)反(fan)應(ying)正常(chang)。
③結(jie)果判(pan)讀(du)：檢(jian)測(ce)完(wan)成後，軟(ruan)件自(zi)動(dong)生成Ct值。Ct值越低，表(biao)明(ming)病毒載量(liang)越(yue)高。結(jie)果需與(yu)陰(yin)/陽性(xing)對照(zhao)對比驗證。
2.ELISA免(mian)疫檢(jian)測(ce)儀（快速篩查）
①板(ban)條加(jia)樣：從試(shi)劑盒(he)中(zhong)取(qu)出(chu)預(yu)包(bao)被(bei)板(ban)條，依(yi)次加(jia)入陰(yin)性對照(zhao)、陽性(xing)對照(zhao)和(he)待(dai)測(ce)樣本(ben)，並(bing)加(jia)入酶(mei)標(biao)記物。
②溫育(yu)與洗滌(di)：37℃避光(guang)溫(wen)育(yu)60分鐘後，用洗滌(di)液清(qing)洗板(ban)孔5次，去(qu)除(chu)未(wei)結合(he)物質。
③顯(xian)色與測(ce)定：加(jia)入底(di)物液避(bi)光(guang)反(fan)應(ying)15分鐘，再加入終止液(ye)。15分(fen)鐘(zhong)內(nei)將(jiang)板(ban)條放(fang)入儀器，在450nm波(bo)長(chang)下讀取OD值，分析樣本(ben)陰(yin)陽性(xing)。
三、註意(yi)事項與維(wei)護(hu)要點(dian)
1.避(bi)免(mian)汙(wu)染(ran)：實(shi)驗區域應(ying)分區，操(cao)作(zuo)中(zhong)勤(qin)換手套(tao)，耗(hao)材(cai)壹(yi)次性(xing)使用。
2.質量(liang)控制：每批(pi)次檢(jian)測(ce)均需設置陰(yin)/陽性(xing)對照(zhao)，確(que)保(bao)試(shi)劑有(you)效性及操(cao)作(zuo)準(zhun)確(que)性。
3.儀器維護(hu)：定期(qi)清(qing)潔(jie)樣品(pin)艙(cang)，檢(jian)查光(guang)學(xue)系(xi)統(tong)與加(jia)熱模(mo)塊。長期(qi)不(bu)用(yong)時斷電(dian)存放(fang)於幹燥環(huan)境(jing)。
4.數據(ju)管(guan)理：結(jie)果導(dao)出保(bao)存備(bei)份(fen)，便於溯源與(yu)分析(xi)。部(bu)分(fen)儀器支(zhi)持USB導出(chu)或(huo)直接(jie)打印(yin)報告。
結語
非洲(zhou)豬(zhu)瘟快檢(jian)儀是疫情防線上的“偵察兵”，其(qi)規範(fan)使用貫穿(chuan)於樣(yang)本(ben)處(chu)理(li)、精(jing)確(que)操(cao)作(zuo)及系(xi)統(tong)維護(hu)的全過(guo)程(cheng)。無論(lun)是實(shi)驗室(shi)的(de)熒光(guang)PCR儀，還(hai)是現(xian)場(chang)便捷的(de)ELISA檢(jian)測(ce)儀，只(zhi)有嚴(yan)格遵(zun)循流程(cheng)，才(cai)能確(que)保(bao)結(jie)果可(ke)靠(kao)，真(zhen)正實現早(zao)發(fa)現、早(zao)處置，為生豬產(chan)業築(zhu)牢(lao)安全屏(ping)障。
